Регистрация сигнальных молекул
Актуальность работы:
Свойство бактерий вида Agrobacterium tumefaciens вызывать у растений корончато-галловую болезнь связано с присутствием в их клетках крупных (95-156 мДа) конъюгированных Ti-плазмид (от англ. tumor-inducing – вызывающий опухоль). В процессе идентифицирования растений часть генетического материала Ti-плазмид – тДНК (от англ. transferred DNA – передаваемая) перемещается в растительные клетки и интегрируется в хромосомы, оставаясь частью наследственного материала. Гены тДНК экспрессируются в трансформарованных растительных клетках, нарушают их фитогормональный баланс и определяют синтез специфических ------- соединений.
Таким образом, агробактерии являются природными "генными инженерами", осуществляющий поразительный по филогенетической дальности перенос генетической информации. На основе агробактерий сконструированы эффективные векторные системы для генетической инженерии растений.
Агробактириальная трансформация происходит в результате сложного процесса взаимодействия между бактериальными и растительными клетками. В этом процессе одной из решающих стадий является рецепция агробактериями особых сигнальных молекул, присутствующих в экссудатах поврежденных тканей растений. Сигнальные молекулы индуцируют экспрессию генов области vir (агробактериальных Ti-плазмид), контролирующих вырезание тДНК и ее перенос в клетки растений. Агробактерильная трансформация наблюдается у широкого круга голосеменных и двудольных растений, однако, она отмечена лишь у весьма незначительного числа однодольных растений. Одной из причин ограничений агробактериальной трансформации однодольных считается присутствие в их клетках сигнальных молекул, индуцирующих процессинг и перенос тДНК.
Цель работы:
В настоящее время имеются противоречивые данные относительно наличия таких сигнальных молекул у однодольных растений. В связи с этим, целью данной работы был анализ ряски на присутствие у них сигнальных молекул, индуцирующих процессинг тДНК.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Использование Ti-плазмид агробактерий в генетической инженерии растений
- Краткая характеристика Agrobacterium tumefaciens
- Создание векторов на основе Ti-плазмид
- Процессинг тДНК в бактериальной клетке и ее перенос в клетки растений
- Разработка система трансформаций растений с помощью Agrobacterium tumefaciens
- Проблема сохранения чужеродных генов, перенесенных в растение
- Анализ экспрессии чужеродных генов в трансформированных растениях
- Краткие характеристики ряски
- Сигнальные молекулы, их способность индуцировать процессинг тДНК
- Оборудование
- Бактериальные штаммы и плазмиды
- Среды микробиологические для культивирования растений
- Другие растворы
- Ферменты, используемые в генной инженерии
- Антибиотики
- Инкубация Agrobacterium tumefaciens с экссудатами тканей растений
- Выделение тотальной ДНК Agrobacterium tumefaciens
- Блод-гибридизация тДНК по Саузерну
- Трансформация клеток Esherichia coli