Культивирование пикорнавирусов на примере получения полиовируса типа 3 в культуре клеток hela.
В качестве конкретной методики культивирования вирусов можно привести способ выращивания полиовируса в перевиваемых клетках.
Все процедуры проводятся в стерильных условиях.
1. Определенные сублинии клеток HeLa (например, HeLa S3) могут расти в средах с низкой концентрацией ионов кальция (например, CaS2MEM). Для эффективного заражения существенно, чтобы клетки хорошо росли в виде однородной суспензии. Клетки осаждают низкоскоростным центрифугированием (15 мин при 900 g) и ресуспендируют в среде CaS2MEM до концентрации ~ 2.107 кл/мл (~1/20 исходного объема).
2. К клеточной суспензии добавляют вирус в концентрации 10—50 БОЕ на клетку; инкубируют ее на магнитной мешалке в течение 1 ч при 35 °С.
3. Суспензию разводят той же средой до концентрации 2.106 кл/мл и добавляют 100 мкКи [3Н]-уридина.
4. Клеточную суспензию инкубируют в течение 8 ч, после чего осаждают клетки низкоскоростным центрифугированием (15 мин при 900 g) и промывают один раз фосфатным буферным раствором (PBS), не содержащим ионов магния и кальция.
5. Клетки ресуспендируют в PBS (5-107кл/мл) и проводят три цикла замораживания — оттаивания.
6. Остатки клеток удаляют центрифугированием.
7. Супернатант сохраняют для дальнейшей очистки.
